Die Vorbereitung von fluoreszierenden Antikörpern oder genetischen Markern, die die Aktivität von Hormonen und Neurotransmitter-Rezeptoren identifizieren, ist nicht nur schwierig, sondern auch sehr zeitaufwendig. Dieser Artikel beschreibt eine nützliche alternative Methode, die zur Aufzeichnung der physiologischen Reaktionsveränderungen durch die Bindung eines Agitators an seine Homogenrezeptoren verwendet werden kann, von denen viele G-Protein-gekoppelte Rezeptoren sind. Wenn der Agitator an einen G-Protein-gekoppelten Rezeptor bindet, kann eine Reihe von schnellen Kaskadenreaktionen ausgelöst werden, die in der Regel dazu führen, dass Kalziumionen sofort an den Speicherorten innerhalb der Zelle freigesetzt werden. Früher wurden momentane Veränderungen der intrazellulären Kalziumionenkonzentration ([Ca2 + i]) in der Flow-Zytologie zur Identifizierung der funktionellen Rezeptor-Expression in der Zell-Subpopulation [2] verwendet, in der wir festgestellt haben, dass das perimotive Proben-Transfer-System des neuen CytoFLEX-Analyzers besonders für die Kalziumionenforschung auf Agitationsbasis geeignet ist. Mit dem auf Estern basierenden grünen Fluoreszenzcalciumindikator Fluo-4 AM (LifeTechnologies) können Veränderungen in [Ca2+i], die in HEK-293-Zellen in ATP-Stimulationsreaktionen auftreten, bestimmt werden. Einfache Verbesserung der Rohrleitung des CytoFLEX-Analyzers für einfacheren Zugang zu Probenröhren, in denen Agitatoren eingesetzt werden; Bei weiteren Verbesserungen kann die Methode der „Stopp Time“-Detektion implementiert werden. Durch die Gegenanwendung von Agitativen als physiologischer Kriterium für unsere Versuche konnten wir im Wesentlichen eine Rezeptor-Identifizierung durchführen und ihre Funktionalität schließlich nachweisen. von Ira Schieren1 Peter Racanelli2 Damian Williams3
Einheiten: 1. Howard Hughes Institut für Medizinische Forschung, Columbia University Medical Center 2. Beckman Coulter Inc., Miami, Vereinigte Staaten 3. Abteilung für Pathologie und Zellbiologie, Columbia University Medical Center)