Die Isodensitätszentrifugationsmethode wird auch als Zonenzentrifugation bezeichnet.

Diese MethodeVorteileEs ist möglich, mehrere oder alle Komponenten in der Probe gleichzeitig zu trennen, mit einer guten Auflösung, einer guten Trennungseffekt und einer reineren Komponente auf einmal zu erhalten.

NachteilEs ist eine lange Zentrifugalzeit, die Vorbereitung von Gradientflüssigkeiten und hohe Betriebsanforderungen erforderlich ist.

Entsprechend dem Prinzip der Zentrifugaltrennung kann die Dichtegradentzentrifugal inGeschwindigkeitszone mit Zentrifuge(Ratezonale Zentrifugationsmethode, R-Z) 和Gleichdichte Zentrifuge (Isopyknische Zentrifugationsmethode).

Die Geschwindigkeitszonenband-Zentrifuge kann auch als isozonale Dichtezentrifuge bezeichnet werden und ist die zentrifugierende Reinigung der gemischten Probe basierend auf der unterschiedlichen Volumengröße und den unterschiedlichen Ablagekoeffizienten der verschiedenen Komponentenpartikel in der Probe.

Die getrennte Probenlösung wird bei der Zentrifugierung auf eine Gradientensäule gelegt, die aus Dichtegradientenmaterialien (z. B. Saccharose, Cäsiumchlorid (CsCI) * usw.) gebildet wird. Die Dichte der Probenpartikel muss größer sein als die Dichte eines Punktes in der Gradientensäule, sonst kann die ideale Zonenzentrifugierung nicht erzielt werden. Bei der Zentrifugierung bilden die verschiedenen Komponenten in der gemischten Probe jeweils ihre jeweiligen Zonenbanden an verschiedenen Stellen der Gradientflüssigkeitssäule, wählen Sie die geeignete Drehzahl und Zeit für die Zentrifugierung, wenn die jeweiligen Komponentenbanden weit entfernt sind, schließen Sie die Zentrifugierung und entfernen Sie das Zonenband.Auf diese Weise können die einzelnen Komponenten der gemischten Probe durch eine Zentrifuge getrennt werden, deren Reinheit und Recyclingrate die Anforderungen erfüllen können.

VorteileEs ist eine Trennung Reinigung, die Komponente des Ablagekoeffizienten von mehr als 20% kann diese Methode wählen, die hohe Auflösung, die Operation kann die Komponente des Ablagekoeffizienten von 5% ~ 10% der Probe gut trennen.

NachteilEs ist die Begrenzung der Bedingungen des Materials, die Flüssigkeitskonzentration der Probe kann nicht zu hoch sein, sonst sind die Betriebsbedingungen schwer zu kontrollieren, während diese Methode im Vergleich zur Differenzzentrifugationsmethode die Menge an Proben ist viel kleiner.

Abbildung 1 Geschwindigkeitszone mit Zentrifuge

Die Zeit der Geschwindigkeitszone mit Zentrifuge muss streng kontrolliert werden, kann nicht zu kurz sein, sonst ist die Probenbereich unklar und die Zeit kann nicht zu lang sein, sonst kann die Trennkomponente sinken. Die Ablagegeschwindigkeit der zu trennenden Probenpartikel hängt von Faktoren wie der Form, der Größe, der Dichte und der Zentrifugalkraft der Partikel ab. Der Zustand der Probe vor und nach der Zentrifuge ist in Abbildung 1 dargestellt.

Die klassische Anwendung der Ratezonenzentrifuge ist die Reinigung verschiedener Subzelluläre (Ribosome, Mitochondrien, Exosome usw.) und Viruspartikel (Virenträger, Impfstoffe usw.) durch die Gradientenzentrifuge der Sucrose-Dichte. Beispielsweise 70S-Ribosom-Abfälle, die wir in der vorherigen Phase erhalten haben, können nach der Hydrolyse mittels einer Gradientenzentrifuge der Sucrose-Dichte weiter isoliert und gereinigt werden, um die beiden Untereinheiten 50S und 30S zu erhalten. Die spezifischen Experimente sind wie folgt:

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Aufmerksamkeit auf frühere Zentrifugalklassen

□Häufige Begriffe für Zentrifuge – Zentrifuge und relative Zentrifuge

□Ablagerungskoeffizient des häufig verwendeten Begriffs

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* Genehmigungsnummer: RA-051-cent-adv-ruo

* Datum der Änderung: 16.10.2020

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